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枯草芽孢桿菌的高密度發酵及噴霧干燥方法

瀏覽次數:19652022/01/14  

1. 一種枯草芽孢桿菌的高密度發酵及噴霧干燥方法,其特征在于,包括如下步驟: (a) 、菌種活化:將在4°C溫度下斜面保存的枯草芽孢桿菌劃線于NA培養基上,于30?37 °C培養20?30h; (b) 、種子液制備:挑取活化的菌落,接種到滅菌后的肉湯培養基中,于30?37°C、150? 220rpm恒溫振蕩搖床培養20?30h,制成種子液; (c) 、發酵罐培養:將制備好的枯草芽孢桿菌種子液以1?10%的接種比例移入裝有發 酵培養基的發酵罐中;發酵過程中采用補料分批發酵控制方法:在發酵第6h前流加葡萄糖 液維持5?10g/L殘糖濃度;同時補加酸性pH調節劑或堿性pH調節劑使發酵液pH維持在6.5 ?8.0范圍;其它發酵條件為:通氣量1?3: 1VVM,溫度30?37°C,攪拌轉速200?600rpm,罐 壓0.03?0.07MPa,發酵時間20?30h;得到高密度發酵菌液; (d) 、噴霧干燥:在高密度發酵菌液中加入2?10%w/v的保護劑,攪拌均勻后進行干燥; 噴霧干燥條件為:進風口溫度150?180°C,出風口溫度70?90°C,進料速度1?3L/h;收集得 到枯草芽孢桿菌干粉制劑。

2. 根據權利要求1所述的一種枯草芽孢桿菌的高密度發酵及噴霧干燥方法,其特征在 于,步驟(c)中,自初始狀態到發酵罐內活菌數達到穩定狀態的發酵階段,發酵罐內的溫度 控制在34?37°C;發酵罐內的活菌數達到穩定狀態至放罐階段,發酵罐內的溫度控制在30 °C?34°C。

3. 根據權利要求1所述的一種枯草芽孢桿菌的高密度發酵及噴霧干燥方法,其特征在 于,步驟(d)中,所述保護劑選自玉米淀粉、蔗糖、糊精、乳糖、碳酸鈣、磷酸氫鈣、硫酸鈣、微 晶纖維素、聚天冬氨酸、脫脂乳粉、海藻糖中的至少一種。

4. 根據權利要求3所述的一種枯草芽孢桿菌的高密度發酵及噴霧干燥方法,其特征在 于,步驟(d)中,發酵菌液中加入的所述保護劑為1.8%碳酸鈣、3.2%微晶纖維素、2%聚天 冬氨酸。

5. 根據權利要求1到4任一項所述的一種枯草芽孢桿菌的高密度發酵及噴霧干燥方法, 其特征在于,步驟(c)中所述發酵培養基的組分為:玉米淀粉5?15g/L,蛋白胨1?5g/L,酵 母粉1?58/1,似0:15?1(^/1,消泡劑1?58/1,余量為水;所述發酵培養基的消后?11為6.5 ?7 ? 5。

6. 根據權利要求5所述的一種枯草芽孢桿菌的高密度發酵及噴霧干燥方法,其特征在 于,所述消泡劑為聚醚類、有機硅類、聚醚改性硅類中的至少一種。

7. 根據權利要求1到4任一項所述的一種枯草芽孢桿菌的高密度發酵及噴霧干燥方法, 其特征在于,步驟⑹中,所述酸性pH調節劑選自于濃度為5?10wt %的稀鹽酸或稀硫酸或 稀磷酸,堿性pH調節劑選自于濃度為5?l〇wt %的氨水或10?20wt %氫氧化鈉。

8. 根據權利要求1到4任一項所述的一種枯草芽孢桿菌的高密度發酵及噴霧干燥方法, 其特征在于,步驟(c)中,得到的發酵菌液的枯草芽孢桿菌活菌數濃度多150億cfu/mL,芽孢 轉化率多97 %。

9. 根據權利要求1到4任一項所述的一種枯草芽孢桿菌的高密度發酵及噴霧干燥方法, 其特征在于,噴霧千燥制得的枯草芽孢桿菌干粉制劑的枯草芽孢桿菌活菌數濃度多1000億 cfu/g,菌種存活率高于85%。


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